Ход определения: 10 г измельченного корма или патматериала (слизистой оболочки желудка или печени) помещают в мерную колбу на 100 мл, заливают до 3/4 объема водой, хорошо встряхивают и нагревают на водяной бане до 80 °С. Через 30 мин охлаждают до комнатной температуры, периодически встряхивая, до­водят водой до метки, встряхивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр в сухой стакан.

Если вытяжка окрашена интенсивно, можно взятую навеску подсушить на водяной бане, затем в тигле обуг­лить до легко распадающейся золы, количественно пе­ренести в мерную колбу на 100 мл и поступать далее, как описано выше.

20 мл фильтрата переносят в коническую колбу, приливают 1 мл 10 %-ного раствора калия хромата и титруют 0,1 н. раствором нитрата серебра до появле­ния неисчезающего кирпично-красного окрашивания.

Содержание натрия хлорида вычисляют по формуле:

х = а- 0,005844-  в1 •   100   ,

св

где X — содержание натрия хлорида, %; а — количество раствора нитрата серебра, пошедшее на титрование, мл; в — объем вытяжки, взятый для титрования, мл; в1 — общий объем вытяжки, мл; с — навеска объекта, г; 0,005844 — количество NaCl (г), связывающегося 1 мл 0,1 н. раствора AgNO3.

Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ АММИАКА В СОДЕРЖИМОМ РУБЦА МИКРОДИФФУЗИОННЫМ МЕТОДОМ

Цель занятия: освоить  определение аммиака в содержимом рубца микродиффузионным методом.

Материадьное обеспечение: серная кислота 0,1н, насыщенный раствор поташа (кар­бонат калия), содержимое рубца, чашки, индикатор Ташира (основной раствор — 40 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метилового красного смешивают с 10 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метиленового синего; рабочий раствор — к 2 мл основ­ного раствора добавляют 2 мл спирта и 4 мл воды), 0,02 н. раствор  едкого натра, 0,02 н. раствор серной кислоты.

Принцип метода основан на вытеснении аммиака ще­лочью из внешней камеры чашки Конвея и связывании его серной кислотой во внутренней камере. По количест­ву связанной кислоты рассчитывают концентрацию ам­миака.

Ход анализа. В одну половину внешней камеры чашки Конвея вносят 1—2 мл жидкого содержимого рубца (после фильтрации через капроновую ткань), во вторую — 1—2 мл насыщенного раствора поташа (кар­боната калия), а во внутреннюю камеру — 1 мл 0,1 н. раствора серной кислоты. В контрольную чашку вместо содержимого рубца вносят 1—2 мл дистиллиро­ванной воды. Чашки герметично закрывают стеклянными пластин­ками (парафиновые — подогретыми, стеклянные — с помощью вазелина), затем содержимое обеих половин внешней камеры смешивают легким покачиванием и ос­тавляют при комнатной температуре на 12 ч. Открывают чашку осторожно при помощи скальпе­ля, после чего во внутреннюю камеру вносят 1—2 капли индикатора Ташира (основной раствор — 40 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метилового красного смешивают с 10 мл 0,1 %-ного спиртового раствора метиленового синего; рабочий раствор — к 2 мл основ­ного раствора добавляют 2 мл спирта и 4 мл воды) и титруют 0,02 н. раствором едкого натра. Индикатор Ташира в кислой среде имеет красную окраску, в щелоч­ной — зеленую.

Концентрацию аммиака рассчитывают по формуле:

(а - в) 0,34К100 ,

                                           X=               C

где а — количество едкого натра, пошедшее на титрование к контроль­ной пробе, мл; в — количество едкого натра, пошедшее на титрование в исследуемой пробе, мл; 0,34 — количество аммиака, связывающего­ся 1 мл 0,02 н. раствора серной кислоты, мг; К — титр раствора едкого натра; 100 — в расчете на 100 мл; С — количество содержимого руб­ца, внесенное в чашку, мл.

. Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ В КОРМАХ

Цель занятия: освоить метод определения  нитратов, нитритов в кормах.

Материадьное обеспечение: Приготовление реактива Грисса. Реак­тив Грисса состоит из двух растворов: 1) 0,5 г сульфани-ловой кислоты растворяют в 150 мл 12 %-ного раствора уксусной кислоты; 2) 0,1 г альфа-нафтиламина раство­ряют в 20 мл кипящей воды, фильтруют через бумажный фильтр и смешивают с 150 мл 12 %-ного раствора уксус­ной кислоты.

Растворы хранят на холоде отдельно в бутылках темного стекла. Перед применением их смешивают в равных объемах.

Прицип метода   извлечение нитратов и нитритов из проб 2 %-ным раствором уксусной кислоты, на восста­новлении нитратов до нитритов цинковой пылью и взаи­модействии последних с реактивом Грисса.

Ход анализа. 10 г средней пробы измельченного корма заливают 200 мл 2 %-ного раствора уксусной кислоты и добавляют на кончике скальпеля порошок активированного угля. Смесь, периодически помешивая, настаивают при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего фильтруют через простой бумажный фильтр.

Для определения нитритов в пробирку с 10 мл филь­трата вносят 0,5 мл реактива Грисса, а в контрольную 0,5 мл 12 %-ного раствора уксусной кислоты. После тщательного смешивания при наличии нитритов появля­ется розовое окрашивание, интенсивность которого оп­ределяют с помощью ФЭК-М через 15 мин при зеленом светофильтре (длина волны 536 мкм) в кюветах с шири­ной рабочих граней 10 мм против контрольной пробы.

Концентрацию нитритов определяют по заранее под­готовленному калибровочному графику из стандартных растворов нитрита натрия, содержащих в 1 мл от 0,05 до 0,6 мкг NO2.

Для определения суммы нитратов и нитритов в про­бирки (опытную и контрольную) с 6 мл фильтрата вно­сят по 2 мл 10 %-ного раствора уксусной кислоты и на кончике скальпеля цинковую пыль (1 г порошка ме­таллического цинка тщательно в фарфоровой ступке смешивают с 10 г сульфата марганца). Пробирку встря­хивают в течение 60 с, после чего вносят 1 мл реактива Грисса и перемешивают. В контрольную пробу вместо реактива Грисса вносят 1 мл 12 %-ного раствора уксус­ной кислоты. Интенсивность розовой окраски определя­ют так же, как и в случае с нитритами.

Концентрацию нитратов определяют по калибровоч­ному графику, приготовленному из растворов калия нитрата, содержащих от 6 до 30 мкг NO3. При этом необходимо вычесть содержание нитритов (полученную концентрацию нитритов умножить на коэффициент 1,348).

Тема: Соли щелочных и щелочно-земельных металлов. Препараты тяжелых металлов

Антагонизм действия ионов магния и кальция

Материальное обеспечение: кролик; 25%-й раствор магния сульфата, 5%-й ра­створ кальция хлорида; два шприца с иглами.

Ход работы:

Кролику под кожу вводят 25%-й раствор магния сульфата, З...5мл на 1 кг живой массы (одинаковые объемы в два места). Вскоре появляются шаткая походка, сонливость, ослабление ды­хания. После наступления наркоза кролику в краевую ушную вену вводят 1...3 мл 5%-го раствора кальция хлорида на 1 кг живой мас­сы. Наблюдают прекращение наркотического состояния.

Вывод

По влиянию на нервную систему ионы кальция являются ан­тагонистами ионов магния.

Взаимодействие солей тяжелых металлов с белком

Материальное обеспечение: 5%-е растворы серебра нитрата, протаргола, свинца ацетата, меди сульфата, ртути дихлорида, 0,9%-й раствор натрия хлорида, вода; штатив с пробирками, пипетки, яичный белок, сливательная чашка, химический стаканчик.

Ход работы:

1.В шесть пробирок наливают по 2...3 мл профильтрованного ра­створа яичного белка (белок одного яйца на 1/2 стакана воды)

2. осторожно  по стенке, не взбалтывая, добавляют по 5 капель 5%-х растворов:

в первую — серебра нитрата,

во вторую — протаргола,

в третью — свинца ацетата,

в четвертую — меди сульфата,

в пятую — ртути дихлорида,

в шестую (контрольную) — такое же количество 0,9%-го раствора натрия хлорида.

После добавления к раствору яичного белка серебра нитрата образуется плотный, белый, хорошо ограниченный осадок, нера­створимый в изотоническом растворе натрия хлорида.

Протаргол дает светло-коричневый, легкий осадок, хорошо ра­створимый в 0,9%-м растворе натрия хлорида.

 При добавлении свинца ацетата получается белый хлопьевидный осадок, нераство­римый в 1...2мл изотонического раствора натрия хлорида.

Меди сульфат образует с белком бледно-голубой, плотный, ограничен­ный осадок, который с 0,9%-м раствором натрия хлорида дает плотный непрозрачный светло-голубого цвета раствор.

Ртути ди­хлорид дает белый хлопьевидный осадок.

Вывод

При взаимодействии с белком соли тяжелых металлов образу­ют альбуминаты, которые выпадают в осадок и нерастворимы в 0,9%-м растворе натрия хлорида.

Профилактическое действие унитиола при отравлении ртути дихлоридом

Материальное обеспечение: две белые мыши одинаковой массы; 0,5%-й раствор ртути дихлорида, 1%-й раствор унитиола; шприцы с иглами, стеклянные колпаки или воронки, вата, сливательная чашка.

Ход работы:

Одной мыши внутрибрюшинно вводят 0,3 мл 1%-го раствора унитиола, а через 15-20 мин обеим — внутрибрюшинно по 0,3 мл 0,5%-го раствора ртути дихлорида и помещают для наблюдения под стеклянные колпаки или воронки. У второй мыши развивает­ся симптоматика отравления ртутью, и она погибает, а первая ос­тается живой, сохраняя активность.

Вывод

Унитиол служит противоядием при отравлении препаратами ртути.

Тема:  ВЕЩЕСТВА,  ДЕЙСТВУЮЩИЕ  НА СОСУДЫ И КРОВЬ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДЛИННОСТИ НАТРИЯ НИТРИТА

Материальное обеспечение: натрия нитрит (NaNO2), разведенная соляная или серная кислота, фарфоровые чашки, пипетки.

Ход работы:

Работу проводят в вытяжном шкафу. Несколько кристаллов на­трия нитрита помещают в фарфоровую чашку и добавляют разве­денную соляную или серную кислоту. В результате химической реакции образуются желто-бурые пары окислов азота.

Токсическое действие нитритов

Материальное обеспечение: белая мышь, две лягушки; натрия нитрит в порош­ке; шприц и иглы,   весы и разновесы, пробирка, вода, вата, сливательная чашка.

Ход работы:

Белой мыши под кожу вводят 0,1 г натрия нитрита, растворен­ного в 0,3...0,5 мл воды, и помещают под стеклянный колпак на 15...20 мин. При вскрытии обнаруживают темно-синюю, бурую окраску внутренних органов и темно-шоколадный цвет крови (об­разование метгемоглобина).

Первой лягушке под кожу вводят 1 мл 10%-го раствора натрия нитрита, второй—1мл 10%-го раствора натрия хлорида. Через 10...20 мин у лягушек обнажают сердце и из его полостей через надрез берут несколько капель крови на фильтровальную бумагу. Отмечают темно-шоколадный цвет крови у лягушки, которой вво­дили нитриты.

Вывод: Под влиянием токсических доз нитритов образуется метгемо-глобин, в результате чего наступает гибель.

Влияние лекарственных веществ на свертываемость крови

Материальное обеспечение: кролик; 0,9%-й раствор натрия цитрата, гепарин, 0,9%-й раствор натрия хлорида; шприц с иглами, три часовых стекла, стеклянные палочки, пипетки.

Ход работы:

У кролика из краевой ушной вены берут кровь и по нескольку капель наносят на три часовых стекла и добавляют на первое стек­ло одну каплю 0,9%-го раствора натрия цитрата, на второе — та­кое же количество гепарина, на третье — одну каплю 0,9%-го ра­створа натрия хлорида. Стеклянной палочкой смешивают ингре­диенты, регистрируют время появления нитей фибрина на тре­тьем стекле и отсутствие их на первых двух.

Вывод: Натрия цитрат и гепарин препятствуют свертыванию крови.

Значение изотонии для сохранения целостности эритроцитов

Материальное обеспечение: 10%-, 0,9%- и 0,4%-й растворы натрия хлорида, ди­стиллированная вода, свежая дефибринированная кровь; штатив с пробирками, пипетки на 0,5 мл, микроскоп, камера Горяева.

Ход работы:

В пробирки наливают по 4 мл соответственно 10%-, 0,9%- и 0,4%-й растворы натрия хлорида и дистиллированную воду. В каждую из них добавляют по две капли свежей дефибринированной крови, взбалтывают и наблюдают в течение часа за про­зрачностью, цветом жидкости, а под микроскопом — за эритро­цитами.

В первой пробирке эритроциты оседают, жидкость прозрачная. В камере Горяева под микроскопом видны сморщенные эритро­циты (звездочки).

Во второй пробирке эритроциты оседают, жидкость прозрач­ная, под микроскопом обнаруживают круглые, нормальные эрит­роциты.

В третьей пробирке происходит неполное оседание эритроци­тов, осадок небольшой, жидкость красноватого цвета (неполный гемолиз). Под микроскопом часть эритроцитов увеличена, разбух­шая.

В четвертой пробирке гемолиз крови, жидкость алая, под мик­роскопом обнаруживают разбухшие, бесформенные (звездочки) эритроциты.

Вывод: Эритроциты сохраняют свою форму; при добавлении к крови изотонического раствора натрия хлорида гемолиз не наступает.

Тема:  ВЕЩЕСТВА, ДЕЙСТВУЮЩИЕ ПРЕИМУЩЕСТВЕННО В ОБЛАСТИ ОКОНЧАНИЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ НЕРВОВ

ВЕЩЕСТВА, РАЗДРАЖАЮЩИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЕ НЕРВНЫЕ ОКОНЧАНИЯ

1. Действие горчичника на кожу

Материальное обеспечение:

кролик; изогнутые ножницы, бритва, мыльный по­рошок, кисточка, фарфоровая чашка, горчичники, бинт, теплая вода, сливательная чашка, вата.

Ход работы:

У кролика выбривают кожу в области живота. Горчичник (5x6 см) смачивают теплой водой, прикладывают на выбритую кожу и фиксируют бинтом. Вскоре наблюдают беспокойство кро­лика, а при снятии горчичника через 10... 15 мин — покраснение кожи вследствие расширения сосудов. Чувствительность кожи кролика при дотрагивании до нее повышена.

Горчичники обладают раздражающим действием.

2. Раздражающее действие аммиака.

Материальное обеспечение:

 кролик; нашатырный спирт; стеклянная воронка, вата.

Ход работы:

В воронку помещают кусочек ваты, смоченной 10%-м раство­ром аммиака, и дают вдохнуть кролику. Вначале отмечают оста­новку дыхания, а затем его углубление и учащение.

Аммиак обладает раздражающим действием. Вследствие раз­дражения слизистых оболочек дыхательных путей рефлекторно происходит кратковременная остановка дыхания.

3. Влияние настойки белой чемерицы на двигательную функцию рубца.

Материальное обеспечение: корова; настойка белой чемерицы; руминограф, ре­зиновая бутылка, носовые фиксационные щипцы.

Ход работы:

На миллиметровой бумаге с помощью руминографа 3. Горяи-новой записывают двигательную активность рубца за 5...8 мин. Внутрь с помощью резиновой бутылки или пищеводного зонда вводят 10 мл настойки белой чемерицы. Повторные записи двига­тельной активности рубца проводят через 15, 30, 45 и 60 мин после введения препарата. Подсчитывают количество движений рубца за 5 мин и среднюю высоту волны сокращения. Убеждаются в уве­личении силы сокращения рубца через 30, 45,60 мин после назна­чения препарата.

Полученные данные заносят в протокол (табл. 1).

Таблица 1

Изменение двигательной функции рубца под действием чемерицы