M.avium сохраняет вирулентность в патологическом материале, хранящемся в 30%-ном
растворе глицерина при температуре 5 С в течение 2 месяцев, а выживаемость в
течение 3 месяцев.
Довольно быстро микобактерии
убивают 50-70% алкоголь (Lindner, 1971). Соление и кипячение
лишь незначительно обезвреживает микобактерии.
Возбудители
туберкулеза довольно чувствительны к действию кратковолнового УФ излучения, и
при облучении их в течение 30с. Погибало 92,3% микобактерий (Шахбанов с
соавт., 1972). Возбудитель бычьего вида погибал при инфракрасном электронагреве
при температуре 75 С в течение 60с., человеческого и птичьего видов при 77 С –
3с. M.intracellulare при 75 С – 30с. Однако значительно
устойчивее к инфракрасному излучению и электронагреву M.scrofulaceum, которая погибла при температуре 75 С только через 5мин.
(Позднякова, 1985).
Устойчивость
микобактерий к химическим и физическим факторам обусловлена как их видовой
принадлежностью, так и условиями в которых они находятся. Атипичные
микобактерии пор сравнению с M.bovis и M.avium более устойчивы к 3%-ному
щелочному раствору формальдегида и 8%-ной эмульсии феносмолина, особенно M.intracellulare и M.gordonae (Колычев, 1984).
10. Иммунизирующие
свойства микобактерий.
Со времени
открытия возбудителя туберкулеза были проведены многочисленные исследования по
изучению иммуногенности живых и убитых туберкулезных и атипичных микобактерий.
Иммунопрофилактика
туберкулеза с помощью вакцин гетерогенного типа, изготавливаемых из
микобактерий, патогенных для холоднокровных, оказалась неэффективной.
Иммунизация
животных микобактериями туберкулеза, убитыми физичес - кими или химическими
методами (тепло, солнечный свет, хлор, йод, олеиновая кислота, мочевина, ацетоном,
бензином и др.), не дала удовлетворительных результатов (Кальметт, 1929).
При
использовании в качестве вакцин возбудителя туберкулеза птичьего,
человеческого, мышиного видов микобактерий, выделенных из медяницы, водяной
черепахи, а также эмульсии, приготовленной из лимфатических узлов туберкулезных
животных, были установлены их иммуногенные свойства.
Вакцина БЦЖ
способствует образованию иммунитета у телят, но не обеспечивает надежной защиты
от туберкулеза. Кроме того, появление аллергии у вакцинированных животных и
отсутствие пригодных для практики методов дифференциации поствакцинальных
реакций на туберкулин от постинфекционных затрудняет ее применение.
Как метод
борьбы с туберкулезом иммунизацию КРС в ветеринарной практике не проводят
(Шишков с соавт., 1986). Некоторые отечественные исследователи рекомендуют
использовать вакцину БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий.
Изучение
вакцинного штамма микобактерий человеческого вида В-115 показало его высокую
остаточную вирулентность. Из штамма «Валле» микобактерий туберкулеза бычьего
вида получен новый авирулентный вакцинный штамм «БК - Харьков» (Черкасс,
Кандыба, Дикий, 1974).
Изученные
иммунизирующие свойства вакцины из штамма БЦЖ, жидкой вакцины «БК – Харьков»,
жидкой вакцины из штамма В-115 (Вейсфлейер, 1975) и из штамма «К» (Говоров,
Кассич с соавт. ,1978) на КРС в экспериментальных и производных условиях.
Прививка телят не дала образования иммунитета достаточной напряженности. При
контакте с больными коровами телята заболевали туберкулезом.
11.
Диагностика.
Для успешной
борьбы с туберкулезом важное значение имеет своевременное выявление больных и
зараженных животных. Диагноз на туберкулез у животных устанавливают на
основание патологоанатомических, бактериологических, включая биологическую
пробу, и аллергическ5их исследований с учетом эпизоотологических данных и
клинических признаков болезни. В качестве дополнительных способов при
диагностике туберкулеза у животных применяют серологические исследования и
симультанную аллергическую пробу.
При проведении
бактериологического исследования используют бактериоскопический, культуральный
и биологический методы.
Для исследования
необходимы кусочки печени, селезенки, легких и лимфоузлы от убитых или павших
животных. При наличии туберкулезных изменений в органах берут пробы из
пораженных участков. При пересылке взятый материал консервируют в 30%-ном
растворе глицерина. От живых животных исследуют молоко, мокроту, слизь, гной и
фекалии.
Для
бактериоскопии из материала делают мазки, фиксируют их на пламени, окрашивают
по Циль-Нильсену и исследуют под микроскопом. Микобактерии обнаруживаются не в
каждом случае, поэтому просматривают100-200 или даже 500 полей зрения.
Иногда в
материале, присланном в лабораторию, туберкулезных микобактерий мало и
обнаружить их трудно. Тогда прибегают к методам обогащения: центрифугированию
либо флотации. Для этого материал измельчают, растирают в ступке, заливают
1%-ным раствором едкого натра, размешивают и переносят в колбу, которую
встряхивают 10-15 мин. Затем содержимое центрифугируют 10 мин., надосадочную
жидкость сливают и, осадок нейтрализуют кислотой и из него делают мазки. Метод
флотации основан на адсорбции углеводородами (ксилолом, бензином, лигроином)
микобактерий туберкулеза и всплывании последних вместе с ними. Его используют
чаще всего при исследовании молока и мокроты, бронхиальной слизи, экссудата.
Пи исследовании
молока 30 мл его наливают в стерильные флаконы с узким горлом емкостью 100 мл и
добавляют равное количество 5%-ного раствора едкого натра. Смесь встряхивают в
течение 2-3 мин., а затем флаконы ставят в водяную баню при температуре 50-60 С
на 1час. Затем к содержимому флакона добавляют 1 мл ксилола, и снова
встряхивают в течение 15 мин. в шуттель-аппарате. После встряхивания во флакон
добавляют дистиллированную воду, пока его содержимое не поднимется до узкой
части горлышка. После отстаивания в течение 1-2 ч. в нем образуется
сливкообразное кольцо. 3-4 капли из него наносят пастеровской пипеткой на
слегка подогретое предметное стекло. По мере подсыхания наносят на предметное
стекло по 3-4 капли еще 2-3 раза, чтобы получить толстый мазок. Мазки
высушивают в сушильном шкафу, обезжиривают эфиром, фиксируют на пламени,
окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют.
Для получения
культур микобактерий материал перед посевом подвергают обработке по методу
Гона, Левенштейна-Сумиоши или Аликаевой. При обработке, по Гону, кусочки
органов и тканей измельчают и растирают в ступке, затем заливают 3-10%-ным
раствором серной кислоты и центрифугируют 10-15 мин. при 3 тыс.оборотов в
минуту. Период воздействия кислотой не должен превышать 20-30 мин. Затем
надосадочную жидкость сливают, в осадок добавляют несколько капель стерильного
физраствора и делают посевы на питательные среды, а также готовят мазки. Применяя
метод Левенштейна-Сумиоши, матеал обрабатывают таким же образом, но перед
посевом осадок отмывают от серной кислоты 1-2 раза физиологическим раствором с
помощью центрифуги. По методу А.П. Аликаевой материал разрезают на кусочки ,
помещают в ступку и заливают 3-6%-ным раствором серной кислоты на 10-20 мин.
Затем кусочки тканей промывают 5 мин. физраствором и растирают.
Для получения
культур микобактерий делают посевы на питательные среды (Петраньяни, Гельберга
и др.). Каждый материал высевают на 5-10 пробирок о средой. Пробирки заливают
расплавленным парафином. Посевы просматривают не реже одного раза в неделю и
выдерживают в термостате не менее трех месяцев. В случае отсутствия роста с
поверхности среды делают соскоб платиновой петлей, готовят мазок для
бактериоскопии и в случае обнаружения в нем микобактерий делают посев на свежую
среду.
Для
биологического исследования используют тот же материал, который был приготовлен
для посева, а наличие в нем серной кислоты нейтрализуют 10%-ным раствором двууглекислой
соды.
Заражают
кроликов, трех морских свинок, а при необходимости трех кур и ведут за ними
наблюдение.
12.
Дифференциальная диагностика.
Микобактерии
различаются между собой по скорости и характеру роста на питательных средах,
по морфологии, по патогенности и другим свойствам. Раньше определение вида их
называли типированием, поскольку они делились на типы. Для определения вида
микобактерий туберкулеза предложено немало методов: бактериоскопический,
культуральный, биохимический и тд.
Для определения
вида чаще всего используют биологический метод. С этой целью ставят биопробу на
трех морских свинках и трех кроликах, а если необходимо, тои на трех курах.
Культуру микобактерий вводят животным в дозе 1мг сырой бактериальной массы,
суспендированной в 1мл стерильного физиологического раствора, морским свинкам
подкожно в области паха, кроликам – внутривенно в краевую вену уха, курам – в
подкрыльцевую вену. У морских свинок при развитии туберкулезного процесса через
2-4 недели на месте введения культуры образуется язва, а также увеличение и
уплотнение регионарного лимфатического узла. Свинки прогрессивно худеют. У
кроликов и кур при развитии туберкулеза наблюдают истощение и снижение
аппетита. Кур исследуют туберкулином. Через три месяца морских свинок, кур и
кроликов убивают, вскрывают и проводят бактериологическое исследование
паренхиматозных органов.
Принадлежность
исследуемой культуры к тому или иному виду определяют по таким данным:
- при
генерализованном процессе у морских свинок и кроликов – M.bovis;
- при
генерализованном процесс6е у морских свинок, а у кроликов отсутствие поражения
или единичные очажки в легких – M. Tuberculosis;
- при
генерализованном процессе у кур и сепсисе у кроликов – M.avium.
М.М. Иванов и
Л.В. Кириллов предложил для определения M.avium исследуемую культуру вводить
двум курам внутрикожно в бородку в дозе 0,1 мг. На месте введения M.avium вызывают припухлость, а к 25 – 30-му дню язву. Иногда наблюдается
перфорация бородки.
Серодиагностика.
Для этой
цели изучали реакции преципитации, агглютинации, диффузной преципитации,
связывания комплемента, гемагглютинация и гемолиза. Реакция преципитации и
реакция агглютинации у млекопитающих животных оказались неэффективными. Лишь у
кур кровокапельная реакция агглютинации дала обнадеживающие результаты.
Наиболее изучена
реакция связывания комплемента (РСК). Ее применяют как дополнительный метод при
отборе животных для диагностического убоя среди реагирующих на туберкулин. В
РСК большую роль играет качество антигена. Лучшим из них ранее считали
метиловый антиген Негр и Бокэ. В последние годы более эффективны были признаны
сложносмешанный антиген Т.А. Луценко и комплексный антиген Ю.Я.Кассича. В
основу сложносмешанного антигена был взят полисахаридный комплекс, полученный
из микобактерий туберкулеза. В состав комплексного антигена Ю.Я. Кассича входит
полисахаридный комплекс, метиленовый экстракт туберкулезных микобактерий и
водный экстракт легочной ткани здорового крупного рогатого скота.
Для постановки
реакции исследуемые сыворотки инактивируют в водяной бане при 60 С в течение
30мин. Антиген и комплемент титруют. В пробирки разливают испытуемые сыворотки
в разведениях: 1:5, 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80 по 0,25мл и добавляют антиген и
комплемент тоже по 0,25мл. Затем штативы с пробирками ставят на 30мин. в
водяную баню при 37 – 38 С, потом вынимают и добавляют в каждую пробирку
гемолитическую систему, которая состоит из 0,25мо 2%-ной взвеси эритроцитов
барана и 0,25мл гемолизина в рабочем титре. Затем штативы снова помещают в
водяную баню на 15мин. Реакцию учитывают предварительно после бани и
окончательно через 16-18 часов. Оценку производят по задержке гемолиза.
Получение положительной РСК в титре 1:20 и выше указывает на наличие у
животного туберкулезного процесса.
Реакцию
гемагглютинации предложил Мидлбрук и Дюбо. Сущность ее заключается в Ом, что
антиген, содержащийся в вытяжках микобактерий, обладает способностью
адсорбироваться на поверхности эритроцитов и сенсибилизировать их к сыворотке
крови туберкулезных животных, которая вызывает агглютинацию таких эритроцитов.
Реакция гемолиза
заключается в том, что после учета реакции гемагглютинации в каждую пробирку
добавляют комплемент. В пробирках, где содержалась сыворотка туберкулезных
животных, наступает гемолиз.
Аллергическая
диагностика. У животных, зараженных туберкулезом, через 15-20 дней появляется
аллергия, что выражается повышением чувствительности к продуктам
жизнедеятельности микобактерий (токсинам).
На протяжении
многих лет для аллергической диагностики применяли только альттуберкулин Коха.
В настоящее время у млекопитающих животных и птиц применяют альттуберкулин и
сухой очищенный туберкулин (ППД – протеин пурифиед дериват).
Альттуберкулин
готовят на биофабриках, выращивая культуры микобактерий туберкулеза бычьего и
человеческого вида на мясо – пептонном глицериновом бульоне в течение 6-8
недель, после чего культуру взбалтывают и стерилизуют в автоклаве при 120 С
30мин., а затем выпаривают при 80-90 С до 1/10 первоначального объема,
отстаивают и фильтруют через фильтр Зейтца. Полученный таким образом туберкулин
прозрачен, коричневого цвета, имеет специфический запах. Он содержит около
40-50% глицерина.
ППД готовят,
выращивая культуры микобактерий туберкулеза на синтетической среде. В фильтрат
8-недельной культуры добавляют трихлоруксусную кислоту для осаждения протеинов.
Осадок обрабатывают, очищая от следов этой кислоты и высушивают. Полученный
препарат представляет собой аморфную массу светло коричневого цвета с
сероватым оттенком. К сухому очищенному туберкулину биофабрики выпускают растворитель,
который представляет собой бесцветную прозрачную жидкость с легкой
опалесценцией. Туберкулин и растворитель выпускают в ампулах и флаконах.
Применяют
туберкулин для внутрикожной и глазной пробы.
Для внутрикожной
туберкулинизации млекопитающих животных (кроме свиней и обезьян) применяют
сухой очищенный туберкулин либо альттуберкулин для млекопитающих, для свиней –
одновременно сухие очищенные туберкулины для млекопитающих и птиц, птицам –
сухой очищенный туберкулин для птиц. Учитывают реакцию у КРС, буйволов,
верблюдов через 72ч. после введения препарата, у коз, свиней, собак, пушных
зверей через 48ч., а у птиц через – 30-36ч. у животных реакция на месте
введения туберкулина проявляется в виде разлитого отека тестоватой или мягкой
консистенции, не имеющей, как правило, четких границ с окружающей тканью. Что
сопровождается местным повышением температуры, а иногда болезненностью. При
учете реакции место введения препарата пальпируют, а при обнаружении изменения
толщину кожной складки измеряют кутиметром, сравнивая ее с толщиной складки
неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина. Крупный рогатый скот,
верблюдов и оленей считают реагирующими на туберкулез при утолщении кожной
складки на 3мм и более; коз, овец, собак, свиней, пушных зверей, кур – при
образовании припухлости в месте введения туберкулина, норок – при опухании
века.
Глазную
туберкулинизацию (офтальмопробу) применяют у лошадей. А иногда у крупного
рогатого скота одновременно с внутрикожной пробой. Ее проводят двукратно с
интервалом в 5-6 дней. Глазной пипеткой на конъюнктиву нижнего века наносят 3-5
капель туберкулина. Учитывают реакцию через 6, 9, 12, 24ч. после первого и
через 3, 6, 9, 12ч. после второго введения. Реакция выражается в выделении
слизисто-гнойного или гнойного секрета и гиперемии конъюнктивы.
Эпизоотологический
метод. При
подозрении на заболевание животного туберкулезом проводят эпизоотологическое
обследование. При этом обобщают и анализируют статистические данные
ветеринарной отчетности о туберкулезе крупного рогатого скота и других видов
животных не менее чем за пять лет. Учитывают данные боенской статистики.
Выясняют когда и по каким ветеринарным документам поступили в хозяйство
животные, условия их размещения в карантине, дату и результаты исследования в
период профилактического карантина; возможность контакта животных этого
хозяйства на пастбищах, водоемах и скотопрогонных трактах с животными
неблагополучных хозяйств. Возбудитель туберкулеза может быть занесен в
благополучные стада с необеззараженным обратом, доставленным с молочного
завода, куда поступило молоко из неблагополучной фермы. При этом заболевание
обычно регистрируют у телят.
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6
|